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传代培养法

发布:jsykswzy 浏览:766次

传代培养法

原理


细胞在培养瓶长成致密单层后,已基本上饱和,为使细胞能继续生长,同时也将细胞数量扩大,就必须进行传代(再培养)。 传代培养也是一种将细胞种保存下去的方法。同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。悬浮型细胞直接分瓶就可以,而贴壁细胞需经消化后才能分瓶。


材料和试剂


1.细胞:贴壁细胞株


2.试剂:0.25%胰酶、1640培养基(含10%小牛血清)


3.仪器和器材:倒置显微镜,培养箱、培养瓶、吸管、废液缸等


操作步骤


1.吸除培养瓶内旧培养液。


2.向瓶内加入胰蛋白酶和EDTA混合液少许,以能覆满瓶底为限。


3.置温箱中2~5分钟,当发现细胞质回缩,细胞间隙增大后,立即终止消化。


4.吸除消化液,向瓶内注入Hanks液数毫升,轻轻转动培养瓶,把残余消化液冲掉。注意加Hanks液冲洗细胞时,动作要轻,以免把已松动的细胞冲掉流失,如用胰蛋白酶液单独消化,吸除胰蛋白酶液后,可不用Hanks液冲洗,直接加入培养液。


5.用吸管吸取营养液轻轻反复吹打瓶壁细胞,使之从瓶壁脱离形成细胞悬液。


6.计数板计数后,把细胞悬液分成等份分装入数个培养瓶中,置温箱中培养。


 


原理


 


细胞在培养瓶长成致密单层后,已基本上饱和,为使细胞能继续生长,同时也将细胞数量扩大,就必须进行传代(再培养)。 传代培养也是一种将细胞种保存下去的方法。同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。悬浮型细胞直接分瓶就可以,而贴壁细胞需经消化后才能分瓶。


材料和试剂


1.细胞:贴壁细胞株


2.试剂:0.25%胰酶、1640培养基(含10%小牛血清)


3.仪器和器材:倒置显微镜,培养箱、培养瓶、吸管、废液缸等


操作步骤


1.吸除培养瓶内旧培养液。


2.向瓶内加入胰蛋白酶和EDTA混合液少许,以能覆满瓶底为限。


3.置温箱中2~5分钟,当发现细胞质回缩,细胞间隙增大后,立即终止消化。


4.吸除消化液,向瓶内注入Hanks液数毫升,轻轻转动培养瓶,把残余消化液冲掉。注意加Hanks液冲洗细胞时,动作要轻,以免把已松动的细胞冲掉流失,如用胰蛋白酶液单独消化,吸除胰蛋白酶液后,可不用Hanks液冲洗,直接加入培养液。


5.用吸管吸取营养液轻轻反复吹打瓶壁细胞,使之从瓶壁脱离形成细胞悬液。


6.计数板计数后,把细胞悬液分成等份分装入数个培养瓶中,置温箱中培养。